DH5α感受态细胞
| 货号 | AO4101 |
| 规格 | 件 |
| 品名 | DH5α感受态细胞 |
| 库存 | 有货（999 件） |
AO4101 DH5α感受态细胞
开泰生物 | 高品质科研试剂
| 货号 | AO4101 |
| 品名 | DH5α感受态细胞 |
| 规格 | 20×100μL |
产品介绍
产品概述 常见问题解答 产品说明书 参考文献 COA查询 产品概述 ■ 产品简介 DH5α感受态细胞是一种可以用于常规质粒高效转化的质粒克隆化学感受态细胞，是实验室较为常用的大肠杆菌菌株之一，广泛用于基因克隆，蓝白筛选，质粒稳定扩增等分子生物学实验。该菌株缺失核酸内切酶( end A)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型( rec A) 减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性； lac ZΔM15是表达β -半乳糖苷酶α片段的一段基因，当M15缺失(△M15)时， lac Z基因虽然能表达ω片段，但不能表达α片段，β -半乳糖苷酶没有活性。当带有 lac Z(α片段)基因的 lac 操纵子通过载体DNA(如pUC19)转化到 lac Z△M15基因型的感受态(如DH5α)时，在有IPTG (异丙基-β-D-1-硫代半乳糖苷) 存在的情况下，IPTG作为乳糖的类似物与 lac I阻遏蛋白结合而使lac操纵子不被抑制，从而利用α-互补性产生完整的β -半乳糖苷酶，β -半乳糖苷酶可分解底物X-gal (半乳糖类似物)，使其呈现蓝色。因此，DH5α感受态可用于蓝、白斑筛选。使用pUC19质粒进行热激活转化，转化效率可以高达1×10 8 cfu/μg DNA以上。 ■ 产品优势 ● 高转化效率：>1x10 8 cfu/µg pUC19 DNA ● 适合于常规质粒高效转化和稳定保存 ■ 产品组成 组分 CC96102-01 CC96102-02 CC96102-C DH5α化学感受态 20 × 100 μL 100 × 100 μL 定制 基因型: F- φ80lac ZΔM15 Δ( lac ZYA- arg F) U169 rec A1 end A1 hsd R17(rk - mk + ) pho A sup E44 thi -1 gyr A96 rel A1 λ- ■ 存储条件 -80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存! ■ 产品应用 DH5α菌株适合于常规质粒的高效转化。 ■ 使用方法 1. 解冻感受态细胞：从-80 ℃取出感受态细胞，冰上融化约5-10 min，然后立即进行DNA样品的转化。 2. DNA样品的转化：每100 μL感受态可加入0.5-10 μL待转化DNA样品（例如质粒、连接产物或重组产物等），然后轻轻弹击管底约5-6次，立即冰上静置孵育30 min。 • 待转化DNA样品的加入体积不宜超过感受态细胞体积的1/10。 • 加入待转化DNA样品后应轻柔弹击混匀，避免使用移液枪剧烈吹打混匀。 • 用于质粒的转化时可将冰浴时间缩短至5-10 min；用于连接产物或重组产物转化时，建议冰浴时间为15-30 min以提高转化效率。 3. 热激处理：冰浴后，将装有感受态和DNA样品的的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰上静置2-3 min以快速冷却。 • 热激时间需要精确控制在45-90 s。 • 热激及转移至冰浴过程中禁止晃动离心管。 4. 复苏培养：加入900 μL 室温或37 ℃预热的LB培养基（或SOC培养基等），上下颠倒数次混匀，然后将离心管倾斜放置在恒温摇床中，37℃ 220 rpm复苏培养45 min。 • 37℃为常规复苏温度，若转入质粒对温度敏感或其它特殊情况需根据实验要求设置合适的温度。 5. 收菌涂板：用于质粒转化时，复苏后可直接取50-100 μL菌液涂板；用于连接产物或重组产物转化时，建议先5000 g，1 min室温离心，吸弃约900 μL上清，然后用剩余
