BCA蛋白定量试剂盒

别名：BCA蛋白浓度测定试剂盒、BCA Protein Assay Kit

用途：总蛋白定量的二喹啉甲酸/BCA分析

储存条件：室温,12个月

产品规格

产品简介

目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法是：BCA法和Bradford法。BCA法测蛋白的原理是在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu+。BCA与Cu+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。BCA 法与传统方法相比，操作更简单、试剂及其形成的颜色复合物更稳定、灵敏度更高。BCA法测定蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，对于5%以内的去垢剂如SDS、Triton X-100、Tween 20、Tween80、NP-40具有很好的兼容性，但易受螯合剂、还原剂等的影响，在测定蛋白浓度前应尽量使样本满足如下要求：EDTA浓度≤10mM、DTT浓度≤1mM、2-ME≤0.01%、无EGTA。BCA Protein Assay Kit在50～1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。本试剂盒适用于微量蛋白质浓度的测定，其最小检出量为25μg/ml。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。操作步骤(仅供参考)：1、 取1ml蛋白标准配制液加入到含有20mg的蛋白标准(BSA)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，配制的蛋白标准溶液应-20℃保存。2、 取适量的20mg/ml蛋白标准溶液，稀释至终浓度为500μg/ml，如取25μl 蛋白标准(20mg/ml)，加入975μl稀释液，充分混匀即配制成500μg/ml蛋白标准溶液。注意：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于同样的溶液中，一般可用0.9%NaCl或PBS作为BSA的稀释液，稀释后的500μg/ml蛋白标准溶液也应-20℃长期保存。3、 根据样品数量，按试剂(A):试剂(B)=50:1的比例配制BCA工作液，即取50份BCA试剂A和1份BCA试剂B，充分混匀，即获得BCA工作液(注意：正常BCA工作液应为苹果绿或墨绿色，如变为紫色或其他颜色应弃用)；例如取5ml BCA试剂A和0.1ml BCA试剂B，配制成5.1ml BCA工作液，BCA工作液室温24小时内稳定。4、 将500μg/ml蛋白标准溶液按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中，加稀释液补足至20μl，其蛋白标准浓度依次为0、25、50、100、200、300、400、500μg/ml。5、 加20μl待测蛋白到96孔板或EP管中，如果样本不足20μl，用稀释液补足至20μl。注意：如果标准品稀释液与溶解待测蛋白的溶液不同，应在待测蛋白中加入20μl稀释液；如果标准品稀释液与溶解待测蛋白的溶液相同，无需在待测蛋白孔中加入20μl稀释液，以减少不同溶液的差异。6、 向各孔或EP管加入200μl配制好的BCA工作液，迅速混匀，37℃孵育30～60min。7、 冷却至室温，立即用酶标仪或分光光度计测定562nm波长处吸光度(如无562nm，540～595nm之间的波长也可)，各孔或EP管吸光度减去蛋白浓度为0μg/ml的标准管的吸光度，以求得的差值为纵坐标： 以标准孔或EP管中蛋白浓度(μg/ml)为横坐标，得出标准曲线及回归方程，根据标准曲线计算出待测样品的蛋白浓度。

别名

BCA蛋白浓度测定试剂盒、BCA Protein Assay Kit

主要用途

总蛋白定量的二喹啉甲酸/BCA分析

保存与运输

保存条件：室温,12个月