RIPA裂解液(强,无PMSF)

别名：RIPA Lysis Buffer

用途：裂解细胞提取总蛋白质,主要用于常规的Western等实验

储存条件：4℃保存，12个月

产品规格

产品简介

多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如Triton、SDS、NP-40等。RIPA即Radio Immunoprecipitation Assay，是一种传统的组织细胞快速裂解液。RIPA裂解液(强,无PMSF)(Enhanced RIPA Lysis Buffer ,Without PMSF)裂解所得的蛋白样品可以用于常规的Western等实验，主要成分是：50mM Tris(pH 7.6)、150mM NaCl、1% TritonX-100、0.5% sodiumdeoxycholate、0.1% SDS等多种裂解剂和抑制剂。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。操作步骤(仅供参考)：1. 取适当量的RIPA Lysis Buffer，在使用前数分钟内加入PMSF(自备)，使PMSF的最终浓度为1mM。注意：本品不含蛋白酶等抑制剂，根据需要在使用前添加蛋白酶、磷酸酶等抑制剂。2. 样品前处理(a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解，然后转移至离心管中。(b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。(c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片，按照每20mg组织加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量)，用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。3. 上述样品转移至冰上，裂解30分钟，中间15分钟后补加一次终浓度1mM PMSF。充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

别名

RIPA Lysis Buffer

主要用途

裂解细胞提取总蛋白质,主要用于常规的Western等实验

保存与运输

保存条件：4℃保存，12个月